方法名稱： 注射用芐星青霉素－芐星青霉素－高效液相色譜法

應用范圍： 本方法采用高效液相色譜法測定注射用芐星青霉素中芐星青霉素的含量。

本方法適用于注射用芐星青霉素。

方法原理： 供試品加乙腈和甲醇溶解，用磷酸鹽緩沖液稀釋，進入高效液相色譜儀進行色譜分離，用紫外吸收檢測器，于波長225nm處檢測芐星青霉素的峰面積，計算出其含量。

試劑：

1. 乙腈

2. 磷酸鹽緩沖液（0.05mol/L）

3. 氫氧化鈉溶液（1mol/L）

4. 甲醇

儀器設備：

1. 儀器

1.1 高效液相色譜儀

1.2 色譜柱

十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，理論塔板數(shù)按芐星青霉素峰計算應不低于2000。

1.3 紫外吸收檢測器

2. 色譜條件

2.1 流動相：0.05mol/L磷酸鹽緩沖液 乙腈=75 25

2.2 檢測波長：225nm

2.3 柱溫：室溫

2.4 流速：1mL/min

試樣制備： 1. 磷酸鹽緩沖液（0.05mol/L）

取磷酸二氫鉀6.8g，加水900mL使溶解，用1mol/L氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值至6.0，加水至1000mL，搖勻。

2. 氫氧化鈉溶液（1mol/L）

取氫氧化鈉適量，加水振搖使溶解成飽和溶液，冷卻后，置聚乙烯塑料瓶中，靜置數(shù)日，澄清后備用。取澄清的氫氧化鈉飽和溶液56mL，加新沸過的冷水使成1000mL，搖勻。

3. 對照品溶液的制備

精密稱取青霉素對照品約40mg，置50mL量瓶中，加乙腈10mL和甲醇5mL使溶解，用上述0.05mol/L磷酸鹽緩沖液稀釋至刻度，搖勻，即為對照品溶液。

4. 供試品溶液的制備

取裝量差異項下的內(nèi)容物，混合均勻，精密稱取約53mg，置50mL量瓶中，加乙腈10mL和甲醇5mL使溶解，用上述0.05mol/L磷酸鹽緩沖液稀釋至刻度，搖勻，即為供試品溶液。

注：“精密稱取”系指稱取重量應準確至所稱取重量的千分之一。“精密量取”系指量取體積的準確度應符合國家標準中對該體積移液管的精度要求。

操作步驟： 分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各10mL，注入高效液相色譜儀，用紫外吸收檢測器于波長225nm處測定峰面積，計算出供試品中青霉素的含量，每1mg的C16H18N2O4S相當于1780青霉素單位。

參考文獻： 中華人民共和國藥典，國家藥典委員會編，化學工業(yè)出版社，2005版，二部，p.228。